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SARS早期检测N蛋白阳性率最高,新冠呢?

   日期:2020-03-08     来源:互联网    作者:admin    浏览:21    评论:0    
核心提示:  今天看到2005年1月一篇文章,这篇文章的核心结论是:  针对SARS,对疑似患者血清标本进行N蛋白的检测 , 比鉴定抗体更有意

  今天看到2005年1月一篇文章,这篇文章的核心结论是:

  针对SARS,对疑似患者血清标本进行N蛋白的检测 , 比鉴定抗体更有意义,而且阳性率高。

  如下图,发病后1-5天,检测N蛋白是阳性率最高的方法。

  我想向各位专家请教的问题是:

  1、这个结论可靠吗?

  2、对于COVID-19的病人,检测新冠的N蛋白也会有这种效果么?

  之所以想探究这个问题,原因是:

  我们拿到了结合新冠N蛋白的核酸适配体(类似抗体),适配体可以用来开发N蛋白的检测方法,如果这个结论在新冠状病毒感染中也成立。我愿意免费开放我们的技术和适配体信息。

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  以下是原文的全文,连接见这里。

  《四种试剂盒在SARS实验室早期诊断中的作用分析》

  高阳 周端华 吴新伟 陈小霜 狄飚 刘于飞 陈芳 杜琳 徐慧芳 顾菁 郑伯健 徐建国

  广州市疾病预防控制中心 ,510080

  摘 要:目的比较 4 种检测严重急性呼吸综合征冠状病毒 (SARS CoV) 基因、抗原和抗体的试剂盒在SARS患者早期实验室诊断的可能作用。方法

  用 3 种酶联免疫吸附试验 (ELISA) 分别检测SARS CoVIgG、SARS CoVIgM 和SARS CoVN蛋白 , 用荧光定量聚合酶链反应 (F PCR) 检测SARS CoV核酸。

  结果:根据 162份血清的检测结果 , 发病 1-5 天 , N抗原的阳性率可达 90.2% (55 /61) ;发病后的第 15-18 天IgG和IgM阳性率为92.8% (13/14) ;根据 82 份咽拭子的检测结果 , F PCR法在发病后1-5天的阳性率可达 5 6 .3% (14 / 2 4 ) , 6-9 天可达 71.4 % (10/14 ) 。

  结论

  除了检测SARS CoV病毒基因的F PCR方法以外,对疑似患者血清标本进行N蛋白的检测 , 具有早期预报意义。

  关键词:严重急性呼吸综合征冠状病毒; 阳性率;

  收稿日期:2004-09-16

  基金: 广东省科技厅资助项目 (2 0 0 3FD0 2 0 4);

The effects of 4 laboratory test kits in early detecting of severe acute respiratory syndrome coronavirus》

  Abstract:Objective To compare the 4 test kits on severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV) gene, antigen and antibody for early diagnose of SARS patients. Methods Three enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) kits were used to detect SARS-CoV IgG, IgM and N protein and fluorescent polymerase chain reaction (F-PCR) kit was used to detect SARS-CoV RNA. Results In 162 serum samples, 90.2% (55/61) became N protein positive in 1-5 days and 92.8% (13/14) became positive IgM and IgG in 15-18 days after the onset of disease, respectively. On 82 gorgling samples, the positive rates of F-PCR were 56.3% (14/24) in 1-5 days and 71.4% (10/14) in 6-9 days after the onset. Conclusion Other than F-PCR, N protein had good effect in the early detection on dubious patients which could lead to effective prevention and control of the epidemic.

  Keyword:Severe acute respiratory syndrome coronavirus; Positive rates;

  Received: 2004-09-16

  早发现、早诊断、早隔离是有效控制严重急性呼吸综合征 (SARS) 爆发或流行的关键。但是, 一些早期病例的临床症状往往不典型, 难以和常见的非典型肺炎鉴别。仅仅依靠临床症状可延误诊断, 错失有效控制疫情的最佳时机。因此, 早期诊断往往依赖于实验室检测结果。目前, 可以发挥早期诊断作用的主要检测方法有SARS冠状病毒 (SARS-CoV) 核酸检测 (RT-PCR) [1]、病毒特异性抗原检测 (酶联免疫吸附试验, ELISA) 和抗体的检测[2,3]。SARS-CoV特异性抗体检测方法包括ELISA、间接免疫荧光法 (IFA) 和免疫印迹法 (WB) 。我们采用国内常用的几种检测病毒基因、抗原和抗体的方法, 对收集到的SARS患者的血清标本和漱口液标本进行比较检测, 结果报道如下。

  材料与方法

  1.标本:

  血清标本包括162份SARS患者血清和73份健康人血清标本。SARS患者血清来源于2003年2-4月广州市住院患者, 其恢复期血清 (发病后3-5月) 抗体中和试验均阳性 (中和试验结果由香港大学提供) 。采血时间最早为发病后第1天, 最晚为发病后第59天。还包括广州2003年12月至2004年1月确诊为SARS的4例患者的血清标本。漱口液标本82份, 2003年2-4月采自广州市各级医院的SARS患者, 采样时间最早为发病后第1天, 最晚为发病后第45天。

  2.检测方法:

  采用第一军医大学珠江医院开发的检测N (nucleocapsid) 蛋白的试剂盒和北京华大吉比爱公司发展的检测IgM和IgG抗体的试剂盒[4], 以及达安基因公司的检测SARS-CoV基因荧光定量PCR试剂盒[5]。均按厂家提供的说明书严格操作。第一军医大学珠江医院开发的ELISA方法, 是用基因工程表达的SARS-CoV N蛋白, 制备单克隆抗兔抗体, 包被微孔板, 以辣根过氧化物酶 (HRP) 标记的双抗体夹心ELISA法。北京华大吉比爱的ELISA方法, 是用纯化的SARS-CoV裂解液为抗原包被微孔板, 为间接ELISA法。达安基因公司的荧光定量PCR试剂盒是以SARS-CoV的pol基因1b区的一个保守区为靶基因, 扩增片段长度为85 bp, 设计特异性引物及荧光探针, 利用逆转录酶将RNA逆转录为cDNA, 再将cDNA进行PCR扩增, 利用全自动荧光PCR检测仪在线检测荧光信号, 用于漱口液等标本中的SARS-CoV核酸。

  结果

  1.特异性抗原、抗体检测结果:

  采用3种ELISA试剂盒检测162例SARS患者血清标本的结果见表1。

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表13种ELISA试剂盒检测162例SARS患者 血清的结果

  珠江医院研制生产的检测N抗原的试剂盒在发病后第1-5天检测阳性率90.2%, 6-9天为76.0%, 10天以后检测阳性率明显下降 (χ2=7.41, P=0.01) 。北京华大吉比爱公司的检测IgM和IgG抗体的ELISA试剂盒在发病后的第15-18天检测率达92.8%。以后随着发病后天数的增加, IgM抗体阳性率下降 (χ2=4.40, P=0.04) , IgG抗体阳性率不变 (χ2=0.01, P=0.93) 。73份健康者血清的N蛋白和IgM和IgG抗体的检测结果均为阴性。

  横向比较不同检测方法在发病后同一时间的检测阳性情况发现, 感染后1-5天N抗原的阳性率最高 (χ2=175.17, P<0.01) , 6-9天仍为N抗原的阳性率最高 (χ2=26.39, P<0.01) , 发病后10-14天, IgM抗体和IgG抗体的阳性率高于N抗原 (χ2=6.51, P=0.04) , 发病后15-18天IgM和IgG抗体的阳性率仍然高于N抗原 (χ2=29.87, P<0.01) , 发病后19天以上者, IgG抗体的阳性率最高 (χ2=67.52, P<0.01) 。

  2.核酸检测结果:

  采用荧光定量PCR法检测82例SARS患者漱口液标本结果见表2。采用达安基因公司研制的荧光定量PCR试剂盒, 发病后第1-5天检测阳性率56.3% (14/24) , 6-9天为71.4% (10/14) , 10-14天为63.6% (14/22) , 15天以后检测阳性率明显下降。

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表2 荧光定量PCR试剂盒检测70份SARS患者 漱口液的结果 下载原表

图1为发病后的不同时间4种检测方法的灵敏度曲线变化。4种试剂盒在SARS发病后不同时间的检出阳性率

  3. 2003年末以后新发4例SARS病例检测结果:对2003年12月至2004年1月在广州发现的4例SARS患者的血清和漱口液标本采用上述4种方法的检测结果见表3。

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表3 2003-2004年广州4例SARS患者的检测结果 下载原表

  讨论

  本研究所选择血清标本来源于162例SARS患者, 其临床症状均符合卫生部颁发的《传染性非典型肺炎临床诊断标准 (试行) 》, 其相应的恢复期血清均经抗体中和试验检测为阳性, 为确诊的SARS病例。所选择的咽拭子标本来自于上述患者。

  研究发现, 对于早期诊断来说, 在发病后1-5天采取患者血样标本, 使用检测N蛋白的试剂盒进行检测, 阳性率可达90.2%。采取咽拭子、肛拭子等标本进行病毒基因的检测, 使用荧光定量PCR阳性率则为56.3% (14/24) [6,7]。检测IgM和IgG抗体的ELISA等试剂盒尽管在实践中表现出一定价值, 但是由于SARS-CoV侵入机体、感染靶细胞、产生抗体需要一定的时间, 在发病1-6天基本上检测不到针对N蛋白的特异性抗体[8,9,10]。因此从理论上讲, 检测N蛋白同时合并SARS-CoV基因检测的方法, 可获得更早的有诊断意义的数据。检测N蛋白的试剂阳性率比较高的原因, 可能是因为N蛋白为SARS-CoV的主要蛋白, 合成的量大, 在病程早期以可溶性抗原的形式释放到患者血液中[4]。

  对2003年末广州新发4例SARS患者血清和漱口液的检测结果, 提供了进一步的资料。从检测结果来看, N蛋白仍然表现出很好的早期诊断价值。但由于2003年末发病的患者临床表现不典型, 症状轻, 预后好, 没有发现传播的证据, 而S基因的序列资料分析结果表明, 导致2003年末感染的SARS-CoV是动物源性的, 和2003年上半年人间流行的SARS-CoV有很大的区别, 因此两者之间表现出的差异, 可能是因为病毒株的不同造成的[11,12]。

  虽然我们选择的患者均经过临床诊断和血清中和试验的确诊, 但是血清标本和患者的相对应关系, 及与咽拭子标本之间的相对应关系不清。尽管2003年疫情的特殊情况给分析结果带来了遗憾, 但仍然提供了非常有价值的参考数据[13]。我们的研究认为, 除了检测SARS-CoV基因的PCR方法以外, 对疑似患者血清标本进行N蛋白的检测, 具有早期预报意义, 虽然还不能够明确诊断, 但是可提醒我们及时采取有效的预防和控制措施, 防止疫情的扩散, 并密切注视患者的抗体变化, 及时明确诊断。

  附:关于新冠核酸适配体的相关问题回答

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